1、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液;
2、取25克樣品液加入225mlmEC肉湯或mTSB肉湯中,36℃增菌培養(yǎng)18-24小時(shí);
3、用3mm接種環(huán)取1環(huán)增菌液,劃線接種到O157菌顯色培養(yǎng)基上,做2個(gè)平板;
4、36℃培養(yǎng)18-24h,O157:H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色,菌落周?chē)鷽](méi)有藍(lán)色暈圈;大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍(lán)色、藍(lán)色或紫色,菌落周?chē)兴{(lán)色暈圈;其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無(wú)色;
5、對(duì)典型菌落可做O157:H7菌血清學(xué)試驗(yàn)和全套生化試驗(yàn)。
注:必須在36℃培養(yǎng)24小時(shí)內(nèi)判讀結(jié)果,以免菌落顏色發(fā)生變化。
操作
稱(chēng)取瓶?jī)?nèi)干粉,用1000ml蒸餾水或純水溶解,可按29.2g/L的比例擴(kuò)大或縮小。
將上述干粉緩慢倒入蒸餾水中,充分?jǐn)嚢枞芙狻?/div>
加熱至100℃,并按常規(guī)不斷攪拌。如果用高壓滅菌鍋,不要加壓,加熱不能超過(guò)100℃。混合物也可以在微波爐內(nèi)加熱,煮沸后,立即移出微波爐并輕輕攪拌,而后再移入微波爐繼續(xù)加熱,直至瓊脂等*溶解(大量氣泡代替泡沫產(chǎn)生,大約需要2分鐘)。
將培養(yǎng)基冷卻至45-50℃后,傾倒于培養(yǎng)皿或試管中。
注1:如果需要選擇性更強(qiáng)的培養(yǎng)基,可在48℃時(shí)加入亞碲酸鉀溶液,使?jié)舛葹?.5mg/l。
注2:如果標(biāo)本中含有較多的變形桿菌,可在48℃時(shí)加入頭孢克肟,使其濃度為0.025mg/l。
注3:如果標(biāo)本中含有較多的假單胞菌和/或氣單胞菌,可在48℃時(shí)加入西蘇羅錠(頭孢磺碇),使其濃度為5mg/l。