大腸桿菌O157計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（膜過(guò)濾法）

用途　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

推薦用于薄膜過(guò)濾法初步計(jì)數(shù)食品中大腸桿菌O157:H7

原理

該培養(yǎng)基推薦用于從肉、禽、奶、嬰兒配方乳等食品中分離大腸桿菌O157：H7（1,2）。它基于三種生化反應(yīng)（酶）進(jìn)行鑒別——葡萄糖醛酸酶、山梨醇發(fā)酵和賴(lài)氨酸脫羧酶（4），大腸桿菌O157為(-)(-)(+)。

培養(yǎng)基中的細(xì)菌會(huì)先發(fā)酵葡萄糖。葡萄糖耗竭后發(fā)酵山梨醇，導(dǎo)致pH值下降（酚紅為指示劑），使菌落呈黃色。培養(yǎng)基還含有β葡萄糖醛酸酶的顯色底物，使菌落為藍(lán)色。對(duì)于山梨醇發(fā)酵（+）菌或賴(lài)氨酸（-）菌，其菌落中的藍(lán)色和黃色疊加為綠色。培養(yǎng)基中有賴(lài)氨酸，使賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性菌代謝后使pH值升高，產(chǎn)生粉色菌落。抑制劑中的莫能菌素抑制革蘭陽(yáng)性菌，在44-44.5℃孵育可抑制革蘭陰性菌，

該培養(yǎng)基也用于食品中的大腸桿菌計(jì)數(shù)（3）。

培養(yǎng)基成分

組成                         克/升

動(dòng)物組織酶解物         5.000

酵母粉                      3.000

氯化鈉                      5.000

賴(lài)氨酸                      10.000

山梨醇                      20.000

葡萄糖                      2.500

硫酸鎂                      1.500

脫氧膽酸鈉               0.150

葡萄糖醛酸鈉            0.500

酚紅                         0.120

顯色混合劑               0.050

瓊脂                        15.000

終 pH (25°C) 7.2±0.2

配制                                         

62.82g重懸于1000ml蒸餾水，加熱至沸騰使*溶解。請(qǐng)勿高壓滅菌。冷卻至45-50°C，無(wú)菌加入1管添加劑（FD295），混勻并傾注平板。

培養(yǎng)結(jié)果　　　　 　 　 　 　 　 　 　

加入添加劑（貨號(hào)FD295）后，44 -44.5°C培養(yǎng)18-24小時(shí)，結(jié)果如下：

大腸桿菌——綠色

大腸桿菌O157:H7——粉色

肺炎克雷伯菌——黃色

脫氧膽酸鈉和添加劑增加選擇性——革蘭氏陽(yáng)性菌被抑制

參考文獻(xiàn)

1.Entis, P.,and I. Lerner.1997. 24-hour presumptive enumeration of Escherichia coli o157:H7 in food using the ISO-GRID method with SD-39 agar.J.Food Prot. 60:883-890.

2.Entis, P.1998. Direct 24-hour presumptive enumeration of Escherichia coli o157:H7 in food using the hydrophobic grid membrane filter,followed by serological confirmation : collaborative study.J.AOAC Int. 81:403-418.

3.Entis, P., and I.Lerner. 1998. Enumeration of #-glucuronidase positive E.coli in foods by using the ISO-GRID method with SD-39 agar.J.Food Prot. 61:913-916.

4.Corry J.E.L, Curtis G.D.W., Baird R.M., Culture Media for Food Microbiology, Progress in Industrial Microbiology, Volume 37.