大腸桿菌（Escherichia coli），又叫大腸埃希氏菌，是動物腸道中的正常寄居菌。大腸桿菌中的小部分是條件致病菌，在一定條件下可以引起人和多種動物發(fā)生胃腸道感染或尿道等多種局部組織器官感染，還會引起關(guān)節(jié)炎、腦膜炎以及敗血型感染等。

大腸菌群指的是需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。

大腸桿菌與大腸菌群常被用作檢驗(yàn)水質(zhì)的指示菌。大腸桿菌隨糞便排出體外；大腸菌群不僅生活在人的腸道，也生活在土壤和地表水中。因此，將大腸桿菌與大腸菌群共同作為指示菌，既可以評價(jià)水樣中的糞便污染程度，也可以評價(jià)水在凈化、儲存、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)中存在的安全問題。

我國《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)》（GB/T 5750.12-2006）、《畜禽飲用水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法》（NY/T 1665-2008）提出了使用酶底物法檢測水質(zhì)中的總大腸菌群和大腸埃希氏菌，并提到“可選用市售商品化制品，以此計(jì)數(shù)來檢測水中總大腸菌群”。

《標(biāo)準(zhǔn) 地表水和廢水中大腸桿菌和大腸桿菌類細(xì)菌的檢測與計(jì)數(shù)》 （ISO9308-1.2014）采用的是濾膜法聯(lián)合CCA顯色培養(yǎng)基法，用于水中大腸桿菌和大腸菌群的計(jì)數(shù)。該方法得出結(jié)果的時間更短，而且無須額外的培養(yǎng)基進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。但是，該方法適合菌落數(shù)小于100的水樣，如：飲用水、自來水、消毒的池水，并不適用于地表水和井水。

據(jù)ISO資料顯示：CCA培養(yǎng)基的靈敏度為94%（大腸桿菌）和91%（大腸菌群），特異性為97%（大腸桿菌）和94%（大腸菌群），性能較好。而HiMedia公司提供的新一款CCA顯色培養(yǎng)基，批間差異極小，批次結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性和準(zhǔn)確度進(jìn)一步提升。

Himedia公司生產(chǎn)的CCA顯色培養(yǎng)基（貨號：M1991AI，品名：HiChrome™ Chromogenic Coliform Ager w/1%Agar）推薦用于檢測水樣和臨床樣本中的大腸桿菌和大腸菌群（如水、污水、尿液等）。該培養(yǎng)基成分和性能符合ISO 9308-1:2014標(biāo)準(zhǔn)。

本品為選擇性培養(yǎng)基，在M1991I的基礎(chǔ)上做了改進(jìn)，可從水樣中同時檢測大腸桿菌和大腸菌群（1）。其中，胰蛋白胨、丙酮酸鈉和山梨醇為生物體提供氮源物質(zhì)、可發(fā)酵的碳水化合物和其他必需的生長營養(yǎng)素。磷酸鹽提供緩沖能力。該培養(yǎng)基配方甚至可以幫助半致死受傷的大腸菌群恢復(fù)并迅速生長。Tergitol-7抑制革蘭氏陽性菌和某些大腸菌群之外的革蘭氏陰性菌。

M1991AI含有三種顯色底物。大腸菌群產(chǎn)生的ß-D-半乳糖苷酶裂解6-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃半乳糖苷，產(chǎn)生粉紅色菌落。大腸桿菌產(chǎn)生的β-D葡萄糖醛酸酶裂解5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖醛酸環(huán)己胺銨鹽（2）。大腸桿菌為β-半乳糖苷酶和β-D葡萄糖醛酸酶雙陽性，因而菌落呈深藍(lán)至紫色（圖1）。第三種顯色原IPTG用于增強(qiáng)顯色反應(yīng)。

圖1. HiCrome^TM CCA顯色培養(yǎng)基，大腸桿菌呈深藍(lán)至紫色，大腸菌群呈粉紅色

該培養(yǎng)基接種時可采用平板傾注或表面涂布技術(shù)。也可采用薄膜過濾法。要確證大腸桿菌，可在深藍(lán)色至紫色菌落上加入一滴Kovacs試劑，出現(xiàn)櫻桃紅的顏色表明為陽性反應(yīng)。

參考文獻(xiàn)                                   

1. Jorgensen, J.H., Pfaller , M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.

2.International Organization for Standardization. Water quality: Enumeration of E.coli and coliform bacteria. Part I-Membrane filtration methods for bacteria with low bacterial background flora. ISO 9308-1:2014.

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