德國(guó)Minerva公司生產(chǎn)的Mynox支原體祛除劑是市面上惟一的支原體殺除劑,而其他牌子的支原體清除劑只是對(duì)支原體產(chǎn)生抑制作用,并無(wú)殺滅效果,因此作用很慢。本文締一生物/締一生物為您分析使用Mynox殺支原體應(yīng)注意什么?
Mynox起效時(shí)間卻只有2-3個(gè)小時(shí)。但在使用Mynox過(guò)程中,還需要注意一些問(wèn)題,以保證zui大的使用效果。
1、Mynox加入的細(xì)胞量要控制。Mynox每管200?l,是加入到2ml包含1x104- 1x105細(xì)胞的培養(yǎng)液中。
2、細(xì)胞要注意打散為單細(xì)胞,不要讓細(xì)胞成團(tuán)。因?yàn)镸ynox需要與支原體直接接觸才能發(fā)揮效力。細(xì)胞成團(tuán)容易造成細(xì)胞間隙,從而成為支原體的藏身之所。
3、Mynox與支原體污染的細(xì)胞的混合2個(gè)小時(shí),即能完成支原體的殺滅。這時(shí)應(yīng)換新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),不必再用Mynox。但這時(shí)不應(yīng)馬上用PCR檢測(cè)支原體,因支原體雖然死亡,但培養(yǎng)液中還游離很多支原體DNA。應(yīng)等傳代三至四次后,再進(jìn)行檢測(cè)。
4、如果想延長(zhǎng)Mynox作用時(shí)間至數(shù)天(細(xì)胞一代時(shí)間),期間應(yīng)觀察細(xì)胞狀態(tài)。必要時(shí)換為標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基,或?qū)ynox與培養(yǎng)基按1:5稀釋培養(yǎng)。
5、如果使用Mynox?消除污染細(xì)胞中的支原體,胎牛血清的*濃度為5%。過(guò)高濃度的血清會(huì)影響Mynox消除支原體的效果。如果使用Mynox消除病毒中的支原體,建議使用無(wú)血清的培養(yǎng)基。
6、包被病毒外層的脂質(zhì)膜成分與支原體膜相似,也是Mynox結(jié)合的對(duì)象。根據(jù)使用Mynox?的濃度和作用時(shí)間,這些病毒極易被Mynox殺除。為了能夠*殺除支原體同時(shí)保證病毒的繼續(xù)培養(yǎng),起始病毒滴度應(yīng)高于106TCID50。
另外,或許有人疑問(wèn),Mynox只能殺滅細(xì)胞外的支原體,而對(duì)細(xì)胞內(nèi)的支原體不起作用。這里需要澄清一下。事實(shí)上,細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的支原體污染就是細(xì)胞外的污染。只有一種支原體能進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi),就是Mycoplasma penetrans,但它并不污染體外培養(yǎng)的細(xì)胞。
綜上所述,您是不是已經(jīng)對(duì)使用Mynox殺支原體應(yīng)注意什么,有所了解。如果還有其他疑問(wèn),請(qǐng)咨詢締一生物/締一生物資深專家。